Die falschen Materialien
Ein weiteres fragwürdiges Detail der Isleworth Mona Lisa war, dass der Künstler sie auf Leinwand gemalt hatte. Als da Vinci Kunst schuf, pinselte er seine Ölfarben im Allgemeinen auf Holz und nicht auf eine Stoffunterlage. Dies traf insbesondere im späteren Teil seiner Karriere zu, als er seine Methode perfektionierte. Schon sehr früh verwendete er eine Leinwand aus Leinen, doch dies war für den Künstler eine seltene Wahl.
Martin Kemp, Professor für Kunstgeschichte an der Universität Oxford, hatte eine der lautesten Stimmen gegen die Ergebnisse der Mona Lisa Foundation. Er sagte, dass die Organisation Infrarottechnologie eingesetzt habe, um Unterzeichnungen unter der Oberfläche der Isleworth Mona Lisa freizulegen und so zu beweisen, dass das Gemälde original sei. Der Professor entgegnete jedoch, dass diese Markierungen nicht mit den üblichen Vorbereitungspraktiken des Künstlers übereinstimmten.